植物的培养方法有哪些方法有哪些方法(植物培养方法包括)
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有很多朋友对植物的培养方法有哪些方法有哪些方法很感兴趣,本篇文章综合一些观点给大家谈谈,同时也有植物培养方法包括知识点可以一起了解,希望对各位有所帮助
本文目录一览:
1、植物组织培养的步骤有哪些?
2、植物组织培养一般方法?
3、植物细胞培养的方法有哪些?
4、植物组织细胞培养按材料和培养方法来分有哪些类
5、植物组织培养的步骤有哪些
植物组织培养的步骤有哪些?
植物组织培养一般确定地指将植物组织由一小部分增殖诱导分化,重新生长成一株新的植株的过程。这个过程有好几种形式,有用培养皿的,有用锥形瓶的,也有用培养罐的。无论是培养皿、锥形瓶还是培养罐,里边都有经过消毒的含各种养分(岁腊糖类、无机盐、合适的碳源、形成酶的金属元素、水等)、植物生长调节剂等所配成的培养基。选取一早誉小部分植物组织(根据植物生长的特点,最好选取茎尖部位,但有特殊要求的可能选取根尖或皮等)经过消毒,植入培养基中,给予充分光照、适宜的温度,根据不同的流程,像在培养罐中的还要给予空气搅拌(经过除菌)。经过一段时间后,植物组织长出愈伤组织,再改变培养基中植物生长调节剂的量及种类,使之分化出根茎叶等部分。陆雀段待根茎叶等长至一定程度,即可移栽至营养钵中等待移栽到大田中了。至于某些药用成分的组织培养,就不用等待这么长时间,只是在其增长到一定量时就可以取出,拿去提取药用成分了。主要步骤就是培养基配制、选种、消毒,植入、分化、诱导、成型等几部分。
植物组织培养一般方法?
植物组织培养可以分为四个阶段:
(1)建立无菌体系,即外植体及培养基的消贺慎毒、接种,获得愈伤组织或器官。
(2)进行增殖,不断分化产生新的植虚拍派株,或直接产生不定芽及胚状体,也可以根据需差贺要反复进行继代培养,以达到大量繁殖的目的。
(3)将植株转移进行生根培养,可以转入生根培养基,也可以直接切取进行扦插生根。
(4)试管苗过渡,即试管苗出瓶后进行一定时间对外界环境的适应过程。
植物细胞培养的方法有哪些?
植物组织培养一般分为以下几种:
1、胚胎培养
指以从胚珠中分离出来的成熟或未成熟胚为外植体的离体无菌培养。
2、器官培养
指以植物的根、茎、叶、花、果等器官为外植体的离体无菌培养,如根的根尖和切段,茎的茎尖、茎节和切段,叶的叶原基、叶片、叶柄、叶鞘和子叶,花器的花瓣、雄蕊(花药、花丝)、胚珠、子房、果实等的离体无菌培养。
3、组织培养
指以分离出植物各部位的组织(如分生组织、形成层、木质部、韧皮部、表皮、皮层、胚乳组织、薄壁组织、髓模橡部等),或已诱导的愈伤组织为外植体的离体无菌培养。这是狭义的植物组织培养。
4、细胞培养
指以单个游离细胞(如用果酸酶从组织中分离的体细胞,或花粉细胞,卵细胞)为接种体的离体无菌培养。
5、原生质体培养。
指以除去细胞壁的原生质体为外植体的离体无菌培养
组织培养的特点
1、培养条件可以人为控制
组织培养采用的植物材料完全是在人为提供的培养基和小气候环境条件下进行生长,摆脱了大自然中四季、昼夜的变化以及灾害性气候的不利影响,且条件均一,对植物生长极为有利,便于稳定地进行周年培养生产。
2、生长周期短,繁殖率高
植物组织培养是由于人为控制培养条件,根据不同植物不同部位的不同要求而提供不同的培养条件,因此生长较快。另外,植株也比较小,往往20-30d为一个周期。所以,虽然植物组织培养需要一定设备及能源消耗,但由于植物材料能按几何级数繁殖生产,故总体来说成本低廉,且能及时提供规格一致的优质种苗或脱病毒种苗。
3、管理方便,利于工厂化生产和自动化控制
植物组织培养是在一定的场所和环境下,人为提供一定的温度、光照、湿度、营养、激素等条件,极利于高度集约化和高密度工厂化生产,也利于自动兆敏化控制生产。它是未来农业工厂化育苗的发展方向。它与盆栽、田间栽培等相比省去了中耕除草、旦猜旁浇水施肥、防治病虫等一系列繁杂劳动,可以大大节省人力、物力及田间种植所需要的土地
植物组织细胞培养按材料和培养方法来分有哪些类
(一)按外植体的来源分
外植体:是指在植物组织培养过程中,从植物母体上取来,用于离体培养的初始材料。
(1)植株培养
是指对具有完整植株形态的幼苗或较大的植株进行离体培养的方法。
(2)胚胎培养
是指对植物成熟或未成熟胚进行离体培养的方法。常用的胚胎培养材料有幼胚、成熟胚、胚乳、胚珠、子房。
(3)器官培养
是指对植物体各种器官及器官原基进行离体培养的方法。常用的器官培养材料有根(根尖,切段)、茎(茎尖、切段)、叶(叶原基、厅侍穗叶片、子叶)、花(花瓣、雄蕊)、果实、种子等。
(4)组织培养
是指对植物体各部位组织或已诱导的愈伤组织进行离体培养的方法。常用的组织培养材料有分生组织、形成层、表皮、皮层、薄壁细胞、髓部、木质部等。
(5)细胞培养
是指对植物的单个细胞或较小的细胞团进行离体培养的方法。常用的细胞培养材料有性细胞、叶肉细胞、根尖细胞、韧皮部细胞等。
(6)原生质体培养
是指对除去细胞壁的原生质体进行离体培养的方法。
(二)按培养过程分
(1)初代培养
将植物体上分离下来的外植体进行最初几代培养的过程。其目的是建立无菌培养物,诱导腋芽或顶芽萌发,或产扮卜生不定芽、愈伤组织、原球茎。通常是植物组织培养中比较困难的阶段,也称启动培养、诱导培养。
(2)继代培养
将初代培养诱导产生的培养物重新分割,转移到新鲜培养基上继续培养的过程。其目的是使培养物得到大量繁殖,也称为增殖培养。
(3)生根培养
诱导无根组培苗产生根,形成完整植株的过程。其目的是提高组培苗田间移栽后的成活率。
(三)根据培养基的类谈清型分为:
1、固体培养: 琼脂、卡拉胶等固化。
2、半液半固体培养:固液双层。
3、液体培养:震荡、旋转或静置培养。
(四)根据再生途径分为:
1、愈伤组织途径;
2、芽增殖途径:
3、原球茎途径:
4、体胚发生途径:
植物组织培养的步骤有哪些
组织培养的方法和步骤
要根据培养目的适当选取材料,选择原则:易于诱导、带菌少。要选取植物组织内部无菌的材料。这一方面要从健壮的植株上取材料,不要取有伤口的或有病虫的材料。另一方面要在晴天,最好是中午或下午取材料,决不要在雨天、阴天或露水未干时取材料。因为健壮的植株和晴天光合呼吸旺盛的组织,有自身消毒作用,这种组织一般是无菌的。培养材料的消毒
从外界或嫌扮基室内选取的植物材料,都不同程度地带有各种微生物。这些污染源一旦带人培养基,便会造成培养基污染。因此,植物材料必须经严格的表面灭菌处理,再经无菌操作手续接到培养基上。
第一步,将采来的植物材料除去不用的部分,将需要的部分仔细洗干净,如用适当的刷子等刷洗。把材料切割成适当大小,即灭菌容器能放人为宜。置自来水龙头下流水冲洗几分钟至数小时,冲洗时间视材料清洁程度而宜。易漂浮或细小的材料,可装入纱布袋内冲洗。流水冲洗在污染严重时特别有用。洗时可加入洗衣粉清洗,然后再用自来水冲净洗衣粉水。洗衣粉可除去轻度附着在植物表面的污物,除去脂质性的物质,便于灭菌液的直接接触。当然,最理想的清洗物质是表面活性物质—吐温。
第二步是对材料的表面浸润灭菌。要在超净台或接种箱内完成,准备好消毒的烧杯、玻璃棒、70%酒精、消毒液、无菌水、手表等。用70%酒精浸10~30s。由于酒精具有使植物材料表面被浸湿的作用,加之70%酒精穿透力强,也很易杀伤植物细胞,所以浸润时间不能过长。有一些特殊的材料,如果实、花蕾、包有苞片、苞叶等的孕穗,多层鳞片的休眠芽等等,以及主要取用内部的材料,则可只用70%酒精处理稍长的时间。处理完的材料在无菌条件下,待酒精蒸发后再剥除外层,取用内部材料。
第三步是用灭菌剂处理。表面灭菌剂的种类较多,可根据情况选取1—2种使用见表。第四步是用无菌水涮洗,涮洗要每次3min左右,视采用的消毒液种类,涮洗3-l0次左右。无菌水涮洗作用是免除消毒剂杀伤植物细胞的副作用注意:①酒精渗透性强,幼嫩材料易在酒精中失绿,所以浸泡时间要短,防止酒精杀死植物细胞。②老熟材料,特别是种子等可以在酒精中浸泡时间长一些,如种子可以浸泡5分钟。③升汞的渗透力弱,一般浸泡10分钟左右,对植物材料的杀伤力不大。④漂白粉容易导致植物材料失绿,所以对于幼嫩材料要慎用。⑤在消毒液中加入浓度为0.08—0.12%的吐温20或80(一种湿润剂),可以降低植物材料表面的张力,达到更好的消毒效果。灭菌剂 使用浓度(%) 持续时间(min) 去除的难易 效果
次氯酸钙 9~10 5~30 易 很好
次氯酸钠 2 5~30 易 很好
氯化汞 0.1~1 5~8 较难 最好
抗菌素 4~50mg/L 30~60 中 较好
制备外植体
将已消毒的材料,用无菌刀、剪、镊等,在无菌的环境下,剥去芽的鳞片、嫩枝的外皮和种皮胚乳等,叶片则不需剥皮。在操作中严禁用手触动材料。
接种和培养 (一)接种
在无菌坏境下,将切好的外植体立即接在培养基上,每瓶接种1-2个,以防止交叉污染。(二)封口
接种后,瓶、管用无菌药棉或盖封口,培养皿用无菌胶带封芹谨口。 (三)温度
培养基大多应保持在25℃左右,但要因花卉种类及材料部位的不同而区别对待。
增殖
外植体的增殖是组培的关键阶段,在新梢等形成后为了扩大繁殖系数,需要继代培养。把材料分株或切段转入增殖培养基中,增殖培养基一般在分化培养基上加以改良,以利于增殖率的提高。增殖1个月左右后,可视情况进行再增殖。
根的诱导
继代培养形成的不定芽和侧芽等一般没有根,必须转到生根培养基上进行生根培养。1个月后即可获得键壮根系。
组培苗的炼苗移栽 试管苗从无菌到光、温、湿稳定的环境进入自然环境,必须进行炼苗。一般移植前,先将培养容器打开,于室内自然光照下放3天,然后取出小苗,用自来水把根系上的营养基冲洗干净,再栽入已准备好的基质中,基质使用前最好消毒。移栽前要适当遮荫,加强水分管理,保持较高的空气湿度(相对湿度98%左右),但基质不宜过湿,以防烂苗。
植物组织培养方法 1 MS培养基的配制包括以下步骤.
培养基母液的配制和保存 MS培养基含有近30种营养成分,为了避免每次配制培养基都要对这几十种成分进行称量,可将培养基中的各种成分,按原量的20倍或200倍分别称量,配成浓缩液,这种浓缩液叫做培养缺唯基母液.这样每次使用时,取其总量的1/20(50 mL)或1/200(5 mL),加水稀释,制成培养液.现将制备培养基母液所需的各类物质的量列出,供配制时使用.
大量元素(母液Ⅰ) mg/L
NH4NO3 33 000
KNO3 38 000
CaCl2·2H2O 8 800
MgSO4·7H2O 7 400
KH2PO4 3 400
微量元素(母液Ⅱ)
KI 166
H3BO3 1 240
MnSO4·4H2O 4 460
ZnSO4·7H2O 1 720
Na2MoO4·2H2O 50
CuSO4·5H2O 5
CoCl2·6H2O 5
铁盐(母液Ⅲ)
FeSO4·7H2O 5 560
Na2-EDTA·2H2O 7 460
有机成分(母液Ⅳ)
ⅣA
肌醇 20 000
ⅣB
烟酸 100
盐酸吡哆醇(维生素B6) 100
盐酸硫胺素(维生素B1) 100
甘氨酸 400
以上各种营养成分的用量,除了母液Ⅰ为20倍浓缩液外,其余的均为200倍浓缩液.
上述几种母液都要单独配成1 L的贮备液.其中,母液Ⅰ、母液Ⅱ及母液Ⅳ的配制方法是:每种母液中的几种成分称量完毕后,分别用少量的蒸馏水彻底溶解,然后再将它们混溶,最后定容到1 L.
母液Ⅲ的配制方法是:将称好的FeSO4·7H2O和Na2-EDTA·2H2O分别放到450 mL蒸馏水中,边加热边不断搅拌使它们溶解,然后将两种溶液混合,并将pH调至5.5,最后定容到1 L,保存在棕色玻璃瓶中.
各种母液配完后,分别用玻璃瓶贮存,并且贴上标签,注明母液号、配制倍数、日期等,保存在冰箱的冷藏室中.
MS培养基中还需要加入2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)、萘乙酸(NAA)、6-苄基嘌呤(6BA)等植物生长调节物质,并且分别配成母液(0.1 mg/mL).其配制方法是:分别称取这3种物质各10 mg,将2,4-D和NAA用少量(1 mL)无水乙醇预溶,将6BA用少量(1 mL)的物质的量浓度为0.1 mol/L的NaOH溶液溶解,溶解过程需要水浴加热,最后分别定容至100 mL,即得质量浓度为0.1 mg/mL的母液.
配制培养液 用量筒或移液管从各种母液中分别取出所需的用量:母液Ⅰ为50 mL,母液Ⅱ、Ⅲ、ⅣA和ⅣB各5 mL.再取2,4-D 5 mL、NAA 1 mL,与各种母液一起放入烧杯中.
配制培养液时应注意:①在使用提前配制的母液时,应在量取各种母液之前,轻轻摇动盛放母液的瓶子,如果发现瓶中有沉淀、悬浮物或被微生物污染,应立即淘汰这种母液,重新进行配制;②用量筒或移液管量取培养基母液之前,必须用所量取的母液将量筒或移液管润洗2次;③量取母液时,最好将各种母液按将要量取的顺序写在纸上,量取1种,划掉1种,以免出错.
溶化琼脂 用粗天平分别称取琼脂9 g、蒸糖30 g,放入1 000 mL的搪瓷量杯中,再加入蒸馏水750 mL,用电炉加热,边加热边用玻璃棒搅拌,直到液体呈半透明状.然后再将配好的混合培养液加入到煮沸的琼脂中,最后加蒸馏水定容至1 000 mL,搅拌均匀.
调pH 用滴管吸取物质的量浓度为1 mol/L的NaOH溶液,逐滴滴入溶化的培养基中,边滴边搅拌,并随时用精密的pH试纸(5.7.0)测培养基的pH,一直到培养基的pH为5.8为止(培养基的pH必须严格控制在5.8).
2 BA为细胞分裂素 NAA 是萘乙酸,为生长素的一种
3 适于百合根的激素暂时没找到
以下是叶片和胚的激素:对麝香百合 (LiliumlongiflorumThunb)叶片进行离体培养 ,可成功获得无菌苗.试验结果表明 :培养基MS +BA 0 1mg/L +NAA 1 0mg/L适于初代培养 ,有助于根和芽的分化 ;MS +BA 0 5mg/L +NAA1 5mg/L适于增殖培养 ,利于愈伤组织的产生 ,并促进芽的分化 ;生根培养基为 1/ 2MS +NAA 1 0mg/L +多效唑 10 0mg/L ;当试管苗根长 1cm时移栽易成活
在含有1 mg/ L IAA,1 m g/ L GA3,6 0 0 m g/ L CH的 MS培养基上培养 ,蔗糖含量为 6 8%时 ,百合幼胚胚性生长最好 ,培养 30 d后可以得到正常胚 .在含有 0 .1 m g/ L NAA,1 m g/ L BA的 MS培养基上可以形成淡绿色的愈伤组织 ,将这些愈伤组织转移到 1 / 2 MS无激素的培养基上培养可以形成大量的不定芽 ,不定芽生根移栽后 ,其成活率可达90 %以上
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